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猪瘟抗体ELISA检测试剂盒

猪瘟抗体ELISA检测试剂盒

产品简介
猪瘟(classical swine fever,CSF)抗体检测试剂盒用于检测猪血清中的猪瘟抗体,评估猪场猪瘟疫苗免疫状况。
详细介绍
介绍
 
猪瘟(classical swine fever,CSF)抗体检测试剂盒用于检测猪血清中的猪瘟抗体,评估猪场猪瘟疫苗免疫状况。
本试剂盒采用阻断ELISA法,在酶标板条微孔上预包被猪瘟抗原。在试验中,加入稀释后的待检血清,经过温育后,若样品中含有猪瘟抗原特异性抗体,则与包被板上的抗原结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后;再加入酶标的抗猪瘟抗体,样本中的抗体阻断了酶标抗体与包被板上抗原的结合;经洗涤除去未结合的酶结合物;在微孔中加入TMB底物液,经酶催化产生的蓝色信号与样本中的抗体含量成反比,加入终止液终止反应后,用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。
 
组份
 
1 抗原预包被板条 1/2块 6 终止液 6/11ml
2 酶结合物 11/22ml 7 阴性对照 1/2ml
3 10倍浓缩洗涤液 50/100ml 8 阳性对照 0.5ml/1ml
4 显色液 11/22ml 9 封板膜 2/4张
5 样本稀释液 100ml 10 说明书 1份
 
需自备的设备及试剂
 
1. 微量移液器:10µl-100µl、100µl-1000µl。
2. 一次性移液器吸头。
3. 量筒:500ml。
4. 96孔板酶标仪。
5. 蒸馏水或去离子水。
6. 洗瓶或洗板机。
 
样品制备
 
取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。
洗涤液的准备浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。
 
注意事项
 
1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,应将试剂盒各组份放置室温至少1小时以上。使用前应摇匀,使用后放回2-8℃。
2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。
3. 终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。
4. TMB(显色液)不要暴露于强光和避免接触氧化剂。
5. 检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8℃)。
 
6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。
7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。
8. 抗原包被板为一次性用品,不得重复使用;
 
操作步骤
 
1. 每次试验均设置阳性对照1孔、阴性对照2孔,阴、阳性对照不用稀释,直接取100ul加入反应孔。
2. 将样品稀释液按80ul/孔加入到微孔反应板内,之后将待检样品血清按20ul/孔加入孔内并吹打混匀(移液器枪头请勿混用);
3. 盖上封板膜(可按实际需要自行裁剪),置37℃温育60分钟。
4. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作浓度洗涤液每孔加250ul,后甩去孔内液体,以上步骤重复4-6次,最后在干净吸水纸上拍干。
5. 每孔加酶结合物100μl,盖上封板膜,置37℃温育30分钟。
6. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗涤4-6次, 方法同4。切记最后在干净吸水纸上拍干。
7. 每孔加显色液100µl,混匀、盖上封板膜37℃闭光显色15分钟。
1. 每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。
 
结果判定
 
用酶标仪于450nm(630nm作参比波长)读取吸光度OD值。
试验成立的条件是:
阴性对照(N)OD值>0.5,同时阳性对照(P)阻断率>50%;
计算方法:
PI (阻断率)=  1 —(样品OD值 ÷ 阴性OD均值)
阴阳性判断:
当PI(阻断率)>40%则判断为阳性;
当PI=<40%且PI>30%为可疑;
当PI<=30%则判断为阴性。
 
贮存方法: 2 - 8ºC下贮存。
有效期: 12个月。
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